二至丸与失笑散对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA的调控(3)

RT-PCR检测显示，与假手术组比较，模型对照组PAI-1mRNA表达显著增强（P<0.01），与模型对照组比较，失笑散组、二至丸组及合方组PAI-1mRNA表达显著降低（P<0.01），3个中药复方组之间比较，合方组最低，二至丸组次之，再次为失笑散组，3者之间比较差异有显著性意义（P<0.01）。见图2.

4讨论

肝纤维化属于中医“黄疸”“胁痛”“积聚”“臌胀”等范畴。“正虚血淤”是肝纤维化的基本病机。二至丸及失笑散是补益肝肾和活血化瘀的经典方剂。已有研究表明，二至丸可以改善慢性乙型肝炎患者的症状和肝功能，降低四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的ALT水平［4，5］及治疗肝纤维化的作用［6］。失笑散联合金铃子散治疗肝硬化腹水有较好疗效［7］。

胆管阻塞性肝纤维化动物模型与CCl4、二甲亚硝胺以及异源血清（如人或牛血清白蛋白或猪血清）诱导的肝纤维化模型相比，具有造模过程中炎症反应轻、肝组织内无肝细胞坏死灶，除汇管区胆汁溢出部有轻度单核细胞浸润外，炎性细胞少见［8］；纤维组织增生明显；纤维化形成快［9］；形成后短期内不自发逆转；实验指标稳定等特点。在研究肝纤维化的病机致病特点、筛选非创伤性肝纤维化血清学诊断指标、新药开发等研究方面具有独特的应用价值，已被广泛应用于肝纤维化研究。

目前研究证实，肝纤维化表现肝脏ECM在肝脏的大量沉积，而ECM的降解受多种因素的调控，近来有研究显示纤溶酶原激活剂（PA）通过PA-纤溶酶-MMPs级联反应途径，最终可产生活化的纤溶酶和MMPs，后两者是降解ECM各组分的重要物质。纤溶酶原激活物包括组织型（tPA）和尿激酶型（uPA），tPA主要参与纤溶过程，溶解血栓，防止血栓形成；uPA主要作用于生理发病机理条件下细胞迁移、组织重建、肿瘤浸润及转移等过程，其中包括细胞外基质降解过程。uPA与细胞表面的uPAR特异性结合可使细胞表面的纤溶酶原转变为纤溶酶，纤溶酶可通过两种途径来参与基质降解。第1种途径是直接降解基质成分，纤溶酶是一种作用广泛的丝氨酸蛋白水解酶，可直接降解多种细胞外基质成分，如纤维蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白和蛋白多糖等；第2种途径是通过激活MMPs酶原，参与细胞外基质的降解［10］。通过这两种途径，纤溶酶能降解大部分基质成分。Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI-1）是纤溶系统的主要抑制物，有研究证实，人体肝内PAI-1含量及活性最高，血浆PAI-1亦具有肝源性，故认为肝脏是PAI-1的主要来源［11］。PAI-1和PA是调节纤溶系统的重要成分，两者的平衡维持着纤溶系统功能的正常，在肝脏纤维化的过程中，这种平衡的失调会促进胶原、糖蛋白、蛋白多糖等ECM的合成增加，并在肝组织内沉积形成纤维组织，从而促进肝脏纤维化的形成和肝硬化的出现。PAI-1基因缺失可以延缓纤维化进程［12，13］。大鼠酒精性肝病研究发现，在肝损伤早期尚未出现明显组织发病机理学改变时，即可诱导PAI-1基因在转录水平的过度表达［14］。临床研究也证实慢性乙型肝炎患者PAI-1蛋白表达着色积分随肝纤维化加重而显著升高［15］。在胆汁淤积性肝纤维化的研究中发现，胆管阻塞两周时而且与野生鼠比较，PAI-1基因敲除鼠uPA、MMP-2及MMP-9活性明显增加，肝纤维化明显减轻；同时发现基因敲除鼠早期肝损伤明显减轻，只是这种保肝作用为时短暂。进一步研究表明PAI-1基因缺失延缓肝纤维化进程是由于促进了细胞外基质降解［16］。胆汁淤积造成肝纤维化的机理复杂，但是有一发病机理学共同点即胆管上皮细胞增生。

本实验运用二至丸和失笑散及其合方使胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏小胆管增生较模型组明显减少，相对肝细胞量剩余较多。在改善纤维化方面，合方效果优于两个单方；与模型组比较，失笑散和合方能够显著降低胆管结扎所致的TBil、ALP、AST、ALT，二至丸能降低ALP、AST、ALT活性，但对TBil无改善。在改善TBil方面，合方和失笑散之间无差异；合方在改善ALP、ALT方面，

优于两个单方；对AST的疗效，合方优于二至丸，与失笑散无差异；两个单方在降低ALP、AST、ALT上均无差异。三个复方均能上调uPA蛋白表达而下调PAI-1mRNA表达；合方效果优于两个单方，且与发病机理和生化结果一致。综上所述，三方终效应均表现为对PAI-1含量和活性的抑制，对uPA含量和活性相对增高，从而促使纤维组织降解，阻止肝纤维化的形成和进展。这既提示了二至丸、失笑散及其合方治疗肝纤维化的作用途经，又提示对胆汁淤积性肝纤维化的中药治疗应当采用综合治疗方法（医学网搜集整理）。

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