血细胞常用的染色方法

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细胞涂片，在用普通光学显微镜观察之前需要固定和染色。固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持其原有结构不发生变化。染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞质、细胞核、细胞器等染上不同的颜色，便于显微镜下观察。各种细胞涂片，常用的染色方法有瑞氏（Wright）、姬姆萨（Giemsa）、巴氏（PaPanicolaou）和苏木素一伊红比emat0Xylineosin，HE）染色。

一、染料与染色

染料（dyes）是一种具有颜色的有机化合物，最早用于织物的着色。随着生物医学的不断发展，显微镜技术的出现和逐步完善，科学家们用染料将生物组织细胞和病原体着色，以利在显微镜下观察各种结构，这种染料称为生物学染色剂（biologystains，BS），生物染色剂的发现和利用促进了医学生物学的进一步发展。

（一）细胞学的基本染料

染料可分为两大类，即天然染料和人工合成染料。生物染色剂多属于后者。各种生物学染色剂都具有产生颜色和与被染组织亲合两种性质。这两种性质主要由两种特殊基团即发色基团（chromophoro）和助色基团（auxochrome）所产生。

所谓发色基团，是染料产生颜色标志的未饱和基团。不同的有机化合物可以吸收不同波长的光，如吸收可见光区以外的光，这些物质是无色的；如吸收可见光区内某些波长的光，这些物质是有色的，其肉眼可见的颜色为被吸收光颜色的互补色。一般饱和芳香族化合物很少有可见光区的吸收带，因而无颜色可见。相反，如苯的衍生物则具有此吸收带而呈现颜色。这些化合物显示的吸收带与不稳定价键（如π键）有关。对苯二酚是无色的，但氧化失去两个氢原子时变为具黄色的对醌式结构，这种使有机化合物在可见光区内产生光吸收的基团称为发色基团，常见的发色基团有烯基、炔基、羰基、偶氮基、亚硝基等。助色基团是一种能使化合物发生电离作用的辅助原子团，能与发色基团构成更完整的共轭体系，使分子激发能进一步降低，染料的色泽加深并使其与被染组织更具亲合力，染料的助色基团是使染料成为盐类的部分，助色基团的性质决定染料在水溶液中的荷电性，常见的助色基团有羟基、竣基、氨基等。根据助色基团的性质，将生物学染色剂分成碱性染料和酸性染料两大类，即能接受质子者为碱性染料，能释放质子者为酸性染料。

1、碱性染料（basicdyes） 属苯胺类蓝色染料，如噻嗪（thiazins）系列，包括亚甲蓝（methyleneblue）、天青A（azure A）、天青B（azureB）、天青C（azureC）和硫堇（thionine），它们的区别在于结合甲基的数量。以天青B为例，它含有两个发色基团，一个次氨基（－N一）和一个邻醌式基团。助色基团为氨基（一NH2），结合一个质子后荷正电，亦称阳离子染料。因此，这些染料与细胞内的酸性成分，如DNA、RNA、特异的中性颗粒基质、某些胞浆蛋白等结合，主要是染细胞核的染料。还有一个很重要染核染料是苏木（hematoxyline），属媒染料（mordantdyes），需媒染剂（如Al3+）参与才能使细胞核着色。

2、酸性染料（aciddyes） 细胞学较重要的酸性染料有两大类，即荧烷一氧杂蒽染料（horane－xanthenedyes）和偶氮染料（azodyes）。前者是一类以氧杂蒽和醌式苯环作为发色基团，以羧基（－COOH）为助色基团的染料，因为羧基能提供一个质子，亦称“阴离子染料”。这类染料的代表是伊红Y（eosinY，俗称黄色伊红）和伊红B（eosinB，俗称蓝色伊红）。这两种染料特别适于与噻嗪类染料（亚甲蓝，天青B等）作对比染色，形成红蓝分明、色泽艳丽的结果，因为伊红具较强的扩散吸附染色特性。酸性偶氮类染料有橙黄G（orangeG）、刚果红（congored）、亮藏花精（brilliantcrocein）等。由于酸性染料是阴离子型染料，因此它们与细胞中的碱性成分结合并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分及胞浆中的一些蛋白质。

除上述酸性和碱性染料外，有的还将在同一条件下既具阴离子型又有阳离子型的染色剂称复合染料，如瑞氏染色剂、姬姆萨染色剂等。

（二）染色原理

细胞着色的原理至今虽无满意的解释，但多数学者认为是物理作用和化学作用综合的结果。

1、物理作用

包括毛细管现象和渗透、吸收、吸附作用等。通过这些因素，染料的色素粒子就能顺利地进入组织、细胞并与其牢固结合而着色。

瑞氏染色法