风湿佳抗炎镇痛及免疫抑制作用的研究

风湿佳是由川乌、草乌、红藤等中药组成，用38°白酒提取而得。民间早已用于治疗风湿、类风湿等疾病，效果良好。为了得到基础理论的支持，我们作了大量的动物实验，对其抗炎、镇痛、免疫抑制作用及毒理作用进行了初步研究，为今后开发、推广应用提供理论依据。

1材料

1.1动物：大鼠由山东省卫生防疫站动物室提供。小鼠、豚鼠、绵羊由滨州医学院动物室提供。

1.2药品：风湿佳由滨州医学院药理教研室制备（由38°白酒提取而得，生药含量0.5g/ml）；地塞米松、可待因均由山东省新华制药厂生产；38°白酒由山东省孙武酒厂提供。

1.3仪器：痛阈测量仪（WQ-9E型）北京海淀电子医疗仪器厂生产。二道生理记录仪（LMS-2B型）成都仪器厂生产。

2方法

2.1抗炎作用2.1.1对抗新鲜鸡蛋清致大鼠足跖肿胀的作用［1，2，3］：取体重180～200gWistar大鼠50只（雌雄不拘），随机分为5组，药前用自制的容积测定仪测定左侧足跖容积，然后分别用下列药物灌胃：50%风湿佳（0.5ml风湿佳加0.5ml凉开水）1ml/100g体重；25%风湿佳（0.5ml风湿佳加0.5ml凉开水）1ml/100g体重；50%的38°白酒（0.5ml白酒加0.5ml凉开水）1ml/100g体重；地塞米松50mg/kg体重；等容量生理盐水。30min后每组大鼠左侧足跖均皮下注射10%的新鲜鸡蛋清0.1ml，药后30，60，90，120，150min均以药前相同的方法测左侧足跖容积，以用药前后足跖容积差作为肿胀程度。

2.1.2对抗二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用［1，3］：取昆明种小鼠50只，体重（25±2）g，随机分为5组，然后分别用下列药物灌胃；50%风湿佳0.1ml/10g体重；25%风湿佳0.1ml/10g体重；50%的38°白酒0.1ml/10g体重；地塞米松25ml/kg；等容量生理盐水。给药1h后，左耳涂30μg二甲苯致炎。3h后颈椎脱臼处死，用直径9mm打孔器在左右两耳相同的部位打下耳片，称重，以左右耳片差作为肿胀程度。

2.2镇痛作用2.2.1加强可待因的镇痛作用（钾离子皮下透入致痛法）：取180～200gWistar大鼠50只（雌雄不拘），随机分为5组。药前每只大鼠均用WQ-9E型痛阈测量仪测大鼠的痛阈值3次（作尾部皮肤致痛刺激，根据甩尾报痛时电流的大小，表示痛阈值的高低），取均数作为药前痛阈值，然后分别用下列药物灌胃；50%风湿佳1ml/100g体重加可待因；50%风湿佳1ml/100g体重；50%的38°白酒1ml/100g体重加可待因；可待因；等容量生理盐水。可待因均为10mg/kg（阈下剂量），药后30，60，90，120min均以用药前相同的方法测得每只大鼠的痛阈，用药前后痛阈值之差作为痛阈提高程度。

2.2.2加强可待因的镇痛作用（小鼠扭体法）［1，4］取昆明种小鼠50只，体重（20±2）g，随机分为5组，然后分别用下列药物灌胃：50%风湿佳0.1ml/10g体重加可待因；50%风湿佳0.1ml/10g体重；50%的38°白酒0.1ml/10g体重加可待因；可待因；等容量的生理盐水。可待因均为15mg/kg（阈下剂量）。30min后每只小白鼠腹腔注射醋酸0.9mg，药后10min内观察是否出现扭体反应。

2.3免疫抑制作用［1，5，6］

2.3.1对小白鼠脾淋巴细胞转化率的影响：取昆明种小白鼠80只，体重（20±2）g，随机分为5组，然后分别用下列药物灌胃：50%风湿佳0.1ml/10g体重；25%风湿佳0.1ml/10g体重；50%的38°白酒0.1ml/10g体重；地塞米松50mg/kg体重；等容量的生理盐水（医考必过网搜集整理）。灌胃1次/d，连续灌胃14d，第15d颈椎脱臼处死，无菌条件下取脾脏，置于盛有适量hanks液的小平皿内，用小镊子轻轻撕碎制成单个脾细胞，经200目筛过滤，100r/min离心10min，用Hanks液洗2次，最后将细胞悬浮在3mlRPMI1640完全培养基中，调整细胞数在5×106个/ml.取上述脾细胞悬液3ml加PHA2mg，37℃培养72h，移入离心管，100r/min离心10min，弃去上清液，底层制成0.5～1ml细胞悬液，滴片2张，染色镜检，计数100个脾细胞，观察转化为母细胞的数量计算百分率。

2.3.2对小白鼠外周血T淋巴细胞百分率的影响：采用α-醋酸奈酶（ANAE）染色法，与上面脾淋巴细胞转化实验共用一批小白鼠，末次灌胃后，取小白鼠尾血涂片，干燥后置37℃卵育液中2h，冲洗后2%甲基绿复染，干燥后油镜下检查100个淋巴细胞，记录阳性细胞（T淋巴细胞）数，求出T淋巴细胞百分率。

2.3.3对小白鼠迟发性变态反应（DTH）的影响（小白鼠足跖增厚法）：取昆明种小白鼠60只，体重（20±2）g，分组及给药均同脾淋巴细胞转化实验，灌胃第10d用绵羊红细胞（SRBC）腹腔注射0.2ml/只，致敏小白鼠，免疫后第4d，即末次灌胃后测量每只小白鼠左后足跖部厚度，然后每只小白鼠左后足跖皮下注射2%SRBC20μl，药后24、48h，用药前相同的方法测左后足跖厚度3次，取均数，用药前后足跖厚度差表示DTH的程度。