风湿佳抗炎镇痛与免疫抑制作用研究(2)

2.3.2对小白鼠外周血T淋巴细胞百分率的影响：采用α-醋酸奈酶（ANAE）染色法，与上面脾淋巴细胞转化实验共用一批小白鼠，末次灌胃后，取小白鼠尾血涂片，干燥后置37℃卵育液中2h，冲洗后2%甲基绿复染，干燥后油镜下检查100个淋巴细胞，记录阳性细胞（T淋巴细胞）数，求出T淋巴细胞百分率。

2.3.3对小白鼠迟发性变态反应（DTH）的影响（小白鼠足跖增厚法）：取昆明种小白鼠60只，体重（20±2）g，分组及给药均同脾淋巴细胞转化实验，灌胃第10d用绵羊红细胞（SRBC）腹腔注射0.2ml/只，致敏小白鼠，免疫后第4d，即末次灌胃后测量每只小白鼠左后足跖部厚度，然后每只小白鼠左后足跖皮下注射2%SRBC20μl，药后24、48h，用药前相同的方法测左后足跖厚度3次，取均数，用药前后足跖厚度差表示DTH的程度。

2.3.4对小白鼠巨噬细胞吞噬功能的影响：取小白鼠60只，分组与给药均同脾淋巴细胞转化实验。末次灌胃后腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml/只。30min后颈椎脱臼处死，用腹腔渗出液涂片，甲醇固定，吉姆萨染片，镜下观察100个巨噬细胞，求出吞噬率和吞噬指数。

2.3.5对小白鼠血清溶血素的影响：与DTH实验共用一批小白鼠，即DTH测量结束后，摘眼球采血于离心管内，分离出血清备用，用生理盐水将血清倍比稀释，将不同血清分别置于血凝试验板上，每孔100μl，再加入0.5%SRBC100μl混匀，保持温度37℃温育3h，观察血球凝集程度。

2.3.6对抗体生成细胞功能的影响：与DTH共用一批小白鼠，即DTH测量结束后，摘眼球采血后，无菌条件下取脾，制成脾细胞悬液（方法同前），取正常5只豚鼠血清混合，按每5ml血清中加入SRBC1ml震荡30min，离心取上清液制成补体，冷冻保存备用，将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水100ml），加热溶解，放在45℃水浴中保温，与等量pH值7.2两倍浓度hanks液混合，分装小食管，每管0.5ml，再向管内加入10%SRBC50μl、脾细胞悬液20μl，迅速混匀倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待凝固后将玻片扣放在片架上，37℃温育1～1.5h，然后加入SA缓冲液稀释的补体（1∶10）继续温育1～1.5h，计数溶血空斑数。

2.4急性毒性实验：取小白鼠40只，体重（25±2）g，随机分为4组，用风湿佳分别以下列剂量灌胃：6ml/kg，10mlg/kg，16mlg/kg和27ml/kg，后2剂量分2～3次在1d内灌完。灌胃后很快出现酒醉状态，2～3h后部分动物开始恢复，观察10d，各组动物死亡数分别为0，2，8，10只。

2.5统计方法：计量资料数据用±s表示，组间比较用t检验，计数资料用X2检验。

3结果

3.1抗炎作用3.1.1对抗新鲜鸡蛋清致大白鼠足跖肿胀的作用：实验结果表明，高浓度风湿佳药后30min足跖肿胀程度与生理盐水对照组比较有显著性差异（P＜0.05），药后60，90，120，150min足跖肿胀程度与生理盐水对照组比较有非常显著性差异（P＜0.01），高浓度风湿佳与地塞米松组比较无显著性差异（P＜0.05）。结果见表1.

表1风湿佳对抗新鲜鸡蛋清致大白鼠足跖肿胀的作用（n=10，±s）

组别剂量C/g.kg-1药后不同时间足跖肿胀程度υ/ml30min60min风湿佳50.10±0.08*0.01±0.13**风湿佳2.50.20±0.090.15±0.09白酒50.20±0.050.15±0.07地塞米松0.050.08±0.02*0.05±0.01**生理盐水100.27±0.070.26±0.08

组别药后不同时间足跖肿胀程度υ/ml90min120min150min风湿佳0.02±0.12**0.02±0.14**0.03±0.09**风湿佳0.18±0.090.19±0.120.12±0.08白酒0.16±0.070.16±0.180.16±0.05地塞米松0.03±0.10**0.01±0.14**0.01±0.15**生理盐水0.20±0.050.21±0.040.20±0.06

注：与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.013.1.2对抗二甲苯致小白鼠耳廓肿胀的作用：实验表明，高浓度风湿佳药后小白鼠耳廓肿胀程度与生理盐水对照组比较有非常显著性的差异（P＜0.01），低浓度风湿佳药后耳廓肿胀程度与生理盐水对照组比较有显著性差异（P＜0.05），高浓度风湿佳与地塞米松组相比较无显著性差异（P＞0.05）。结果见表2.表2风湿佳对抗二甲苯致小白鼠耳廓肿胀的作用（n=10，±s）

组别剂量C/g.kg-1左右耳片重量之差m/mg风湿佳50.05±0.37**风湿佳2.50.10±0.32*白酒50.48±0.84地塞米松0.025-0.10±0.33**生理盐水100.8±0.74

*P＜0.05**P＜0.013.2镇痛作用

3.2.1加强可待因的镇痛作用（大白鼠钾离子皮下透入致痛法）：实验表明，风湿佳加可待因组痛阈提高程度与生理盐水对照组比较有非常显著性差异（P＜0.01），风湿佳组与生理盐水对照组比较有明显差异（P＜0.05），可待因组与生理盐水对照组比较无显著性差异（P＞0.05），证明可待因是阈下剂量。结果见表3.3.2.2加强可待因的镇痛作用（扭体法）：实验表明，风湿佳加可待因组扭体反应动物数与生理盐水对照组比较有非常显著性的差异（P＜0.01），结果见表4.

表3风湿佳加强可待因的镇痛作用（钾离子皮下透入致痛法）

（n=10，±s）