加味烂积丸质量标准研究(2)

色谱柱为Waters Symmetry shield RP18 （150 mm×3.9 mm，5 μm）；流动相为乙腈-甲醇-水-乙酸铵（70∶10∶20∶0.5）；流速1.0 ml·min-1；柱温30℃；检测波长215 nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3 000. 2.2.2 测定波长的选择 以甲醇为溶剂，在波长范围200～400 nm对大黄素、大黄酚溶液进行光谱扫描，结果表明大黄素和大黄酚在（254±1）nm处均有最大吸收，与《中国药典》规定一致，因此选择254 nm为本品高效液相色谱法的测定波长。

2.2.3 对照品溶液的制备

精密称取经过五氧化二磷减压干燥12 h的大黄素对照品5.21 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密称取经过五氧化二磷减压干燥12 h的的大黄酚对照品8.62 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取上述大黄素对照品溶液 15 ml，大黄酚对照品溶液 20 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含大黄素0.015 63 mg和大黄酚0.034 48 mg）

2.2.4 供试品溶液的制备

取本品，研细，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5 ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加2.5 mo/L的硫酸溶液10 ml，超声处理5 min，再加三氯甲烷10 ml，置水浴中加热回流1 h，取出，放冷，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷提取两次，10 ml/次，合并三氯甲烷液，用2 g无水硫酸钠脱水，再用少量三氯甲烷洗涤容器及滤器，洗液并入三氯甲烷液中，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按照上述测定方法，对大黄素及大

黄酚对照品、加味烂积丸样品、缺大黄的阴性对照品进行了测定，结果阴性对照品在相应的保留时间无吸收峰出现，且大黄素、大黄酚对照品色谱峰峰形尖锐，对称性好；供试品中的大黄素、大黄酚色谱峰对称性好，与前后其它峰分离度大于1.5，达到基线分离。

2.2.5 稳定性实验

供试品溶液中大黄素、大黄酚的稳定性实验：取新制备的供试品溶液，每间隔2 h进样1次（10 μl），按上述色谱条件分别测定，，记录其大黄素、大黄酚色谱峰面积的变化，结果供试品10 h内稳定，RSD分别为0.92%和RSD=0.30%（n=6）。

大黄素、大黄酚对照品溶液的稳定性试验：将新制备的的大黄素、大黄酚混合对照品溶液，每间隔2 h进样1次（5 μl）进行测定，结果，大黄素峰面积积分值的RSD=0.34%，大黄酚峰面积积分值的RSD=0.96%（n=6），表明在10 h内稳定。

2.2.6 线性关系

考察配制系列不同浓度（0.003 126，0.009 378，0.015 63，0.021 88，0.031 26，0.046 89，0.078 15 μg/μl）的大黄素对照品溶液，分别精密吸取5 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值A为纵座标，对照品量X为横坐标，作线性回归，得回归方程A = 7 191 076.5 X -11 981.4 （r=0.999 9， n=7）。结果表明，大黄素在0.015 63～0.390 75 μg范围内线性关系良好。

配制系列不同浓度（0.006 896，0.020 69，0.034 48，0.048 28，0.068 96，0.103 44，0.172 4 μg/μl）的大黄酚对照品溶液，分别精密吸取5 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值A为纵坐标，对照品量X为横坐标，作线性回归，得回归方程Y=11 073 892.6X -8 511.5 （ r=1.000 0， n=7）。结果表明，大黄酚在0.034 48～0.862 μg范围内线性关系良好。

2.2.7 重复性实验

取同一批号加味烂积丸样品（060001）6份，分别按样品测定方法测定大黄素、大黄酚总含量。结果平均含量为0.72mg/g，RSD为1.22%（n=6）（医学网搜集整理）。

2.2.8 加样回收实验

大黄素：精密称取已知大黄素含量的样品（批号060001，大黄素含量0.288 3 mg/g）6份，置锥形瓶中，按样品测定方法操作，进行加样回收实验，测定大黄素峰面积并计算加样回收率。实验结果见表1.表1 大黄素加样回收率考察结果（略）

结果大黄素平均加样回收率为100.0%，RSD= 0.95%（n=6），表明在95%～105%之间，本方法回收率良好。

大黄酚：精密量取已知大黄酚含量的样品（批号060001，大黄酚含量0.431 6 mg/g）6份，置锥形瓶中，按样品测定方法操作，进行加样回收实验，测定大黄酚峰面积并计算加样回收率。结果见表2.表2 大黄酚加样回收率考察结果（略）

结果大黄酚平均加样回收率为99.8%，RSD=0.93 %（n=6），表明在95%～105%之间，本方法回收率良好。

2.2.9 样品含量测定

按样品测定方法，测定3批加味烂积丸样品中的大黄素、大黄酚总量。结果见表3.表3 样品含量测定结果（略）

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