延胡索中紫堇碱标准品的制备及含量测定(2)

2.5.2 供试品的制备 取延胡索粗粉约1 g，精密称定，至50 ml具塞三角瓶中，加入70%的乙醇30.00 ml，称重，40 ℃超声提取1 h，取出，补足减失重量，冷却，滤过，取续滤液10.00 ml，回收乙醇，流动相定容至10.00 ml，过0.45 μm滤膜，备用。

2.5.3 线性范围考察 精密称取紫堇碱对照品0.016 4 g于50 ml容量瓶中，用流动相定容，得对照品储备液。取5.00 ml对照品储备液于25 ml容量瓶中，用流动相定容，得质量浓度为65.6 μg·ml-1的对照品标准溶液。分别精密吸取对照品标准溶液2，4，8，12，16，20 μl注入色谱仪，记录峰面积。以色谱峰面积为纵坐标 （Y），紫堇碱的进样量为横坐标 （X），绘制标准曲线，得回归方程：Y = 942.131 6X + 0.293 7，r=0.999 997，样品在0.131 2～1.131 2 μg范围内线性关系良好。

2.5.4 精密度实验 精密吸取同一对照品标准溶液8 μl，照前述色谱条件重复进样6次，测得紫堇碱峰面积的RSD为0.25%，表明测定仪器精密度良好。

2.5.5 稳定性实验 将同一份供试品溶液放置0，2，4，8 h后，照前述色谱条件进样20 μl，测得紫堇碱在8 h内峰面积的RSD为0.21%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.5.6 重复性实验 取同一批样品，按“2.5.2”项下方法，平行制备供试品溶液6份，按前述色谱条件进样20 μl，测得延胡索中紫堇碱含量平均值为0.977 8 mg·g-1，RSD为0.41 %，表明测定方法重复性良好。

2.5.7 回收率实验 取已知含量的样品约0.5 g，共9份，精密称定，分别加入不同量的紫堇碱对照品，按“2.5.2”项下方法制备，按前述色谱条件进样20 μl，测得紫堇碱的平均回收率为97.19%，RSD为2.25%（n = 9），表明测定方法准确可靠。结果见表1.

表1 回收率实验（略）

图1对照品的色谱图（略）

图2样品的色谱图（略）

3 讨论

延胡索生物碱类大部分属于小檗碱或原小檗碱型，它们性质相差较小，极性相近，利用常规的分离方法很难得到高纯度的单体，而高效液相色谱具有柱效高、操作简单、分离出来的化学单体纯度高的特点。我们在利用常规的分离方法制备高纯度的紫堇碱效率较低的情况下，尝试用半制备高效液相来制备紫堇碱单体，结果发现效率高，成本低，适合紫堇碱对照品的大量制备。

延胡索总生物碱在酸水或乙醇中有较好的溶解性能，对于其总生物碱的提取方法，文献报道以回流法为多［6］，但此法整个工艺耗时较长，提取率较低。另有文献报道，以氨-乙醚为溶剂，采用超声、冷浸、回流3种方法提取延胡索，结果表明超声提取方法含量高，操作简便。本实验中，紫堇碱的含量测定采用30倍量70%的乙醇40 ℃超声提取1 h，在确定的色谱条件下，分离度已达到要求。而在制备色谱中，采用乙醚进一步萃取纯化，提高了制备效率（医学网搜集整理）。

【参考文献】

［1］ 高学敏。 中药学［M］。北京：人民卫生出版社，2000：1061.

［2］ 国家药典委员会。 中国药典，Ⅰ部［S］。北京：化学工业出版社，2005： 94.

［3］ 马 红。 扶正益肺巴布膏中延胡索乙素的含量测定［J］。中国中药杂志，2007，32 （17）：1819.

［4］ 龙 进，涂文升。 反相高效液相色谱法测定胃药胶囊中延胡索乙素的含量［J］。中国中药杂志，2004，29 （9）：914.

［5］ 许翔鸿，王峥涛，余国奠，等。 延胡索中生物碱成分的研究［J］。中国药科大学学报，2002，33 （6）：483.

［6］ 邱蓉丽，李 祥，陈建伟，等。 延胡索总碱提取方法研究［J］。中医药研究，2000，16（5）：50.