中药三棱炮制方法工艺优化的考察

【摘要】 目的优化中药三棱炮制方法工艺，考察影响三棱炮制方法的因素。方法参照《中国药典》重点考核醋制工艺，对其进行多因素考察，设计正交实验，在此基础上参考文献中其它炮制方法工艺，进行横向比较。考察标准以三棱的有效部位总黄酮为标准，采用紫外分光光度法（UV）进行含量测定，并对数据作统计学处理（方差分析），找出最佳优化方案。结果醋炙三棱总黄酮含量为最高，比生品含量增加29.79﹪左右，麸炒三棱含量为最低，比生品含量减少52.25﹪左右。其它炮制方法及制法规范中醋烤三棱总黄酮含量比生品含量增加13.10﹪，醋煮三棱总黄酮含量比生品含量增加3.73﹪，醋蒸三棱总黄酮含量比生品增加8.63﹪，清蒸三棱总黄酮含量比生品含量增加3.05﹪；醋炙的最佳工艺为20﹪的用醋量浸润10min在150℃下炒制15min.结论炮制方法及制法规范直接影响三棱总黄酮含量，该研究为优选三棱最佳炮制方法工艺提供参考。

【关键词】 三棱； 炮制方法工艺优化； 紫外分光光度法； 总黄酮

三棱是常用的活血化淤中药，具有破血行气，消积止痛的作用，临床上用于心血管疾病以及子宫肌瘤、子宫内膜异位症等妇科疾病的治疗。目前三棱主要炮制方法及制法规范以醋制法居多，部分地区尚有麸炒或酒麸炒等方法。醋制法中又包括炙、炒、煮、蒸等不同炮制方法工艺。本实验重点以目前最常用的醋炙法［1］为突破口，考察影响醋炙法的因素和水平，探索最佳炮制方法工艺，并在此基础上与文献收载的其它炮制方法及制法规范进行横向比较。

1 仪器与试药

1.1 仪器紫外分光光度仪（UV-2401PC），电子天平（Mettler toledo）。

1.2 试药 三棱药材由河北安国药材市场购入，经鉴定为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.的干燥块茎。芦丁标准品（本校药化教研室提供，纯度>98%）、95﹪乙醇（分析纯）、5﹪亚硝酸钠、10﹪硝酸铝、0.025 g/ml氢氧化钠、蒸馏水、醋（市售）。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的芦丁对照品（自制）0.011 2 g置100 ml的容量瓶中，加60﹪乙醇适量使其完全溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（0.112 mg/ml）。

2.2 供试品溶液的制备按照提取方法考察的结果（见“2.3”项）对不同炮制方法样品（见“2.5”项和“2.6”项）进行提取，得到供试品溶液。具体操作方法为取炮制方法样品粉末5 g，置于100 ml圆底烧瓶中，加入12倍量75﹪的乙醇溶液水浴加热，每次提取1 h，提取3次，过滤，合并滤液，置于100 ml的容量瓶中，并用75﹪的乙醇溶液定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

2.3 标准曲线的考察

2.3.1 最大吸收波长的选择分别用对照品（芦丁）和供试品（三棱醇提物）在紫外－可见分光光度仪上进行全波长扫描（200～700 nm），比较两者的最大吸收峰，结果在250 nm和502.8 nm处各有一个吸收峰，考虑在250 nm左右很多成分都有吸收，会干扰实验结果，故选择502.8 nm为最大吸收波长。

2.3.2 标准曲线的绘制精密吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml上述标准液分别置于25 ml容量瓶中，再精密加入5﹪NaNO21 ml摇匀，放置6 min；加入10﹪Al（NO3）31 ml摇匀，放置6 min；加入NaOH溶液10 ml摇匀，用蒸馏水标定至刻度摇匀，放置15min，配制成含芦丁0，4.48，8.96，13.44，17.92，22.40，26.88 μg/ml的标准溶液。以第一瓶溶液作为空白对照，在波长502.8 nm处测定其它浓度下的吸收率。以芦丁的浓度（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线（见图1），回归方程：Y=4.48X，r=1，表明芦丁在4.48～26.88 μg/ml线性关系良好。

图1 芦丁标准曲线（略）

2.4 三棱提取方法的考察选用回流法提取三棱，考察乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量倍数4个因素，每个因素考察3个水平，设计正交实验（见表1），考虑误差的影响，每次实验进行三次平行实验。具体方法是按照正交表L9（34）设计实验，每次称取三棱粉末5 g（过40目筛），置于100 ml圆底烧瓶中，按照实验设计进行回流提取，后放冷过滤到100 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，然后通过分光光度仪在502.8 nm处进行含量测定，以确定最佳提取方法。由实验结果（见表2）可知，提取因素主次为A>C>D>B，结合比位级可知最佳组合为A2B1C3D3.方法学考察显示ABCD均为极显著因素（见表3）［F值均大于临界值，F0.01（2，18）=6.01］，故最佳提取工艺为A2B1C3D3.即用12倍量的75﹪的乙醇溶液，每次提取1 h，提取3次，即为供试品溶液。

表1 三棱提取工艺实验因素和水平（略）

表2 三棱不同提取方案和实验结果（略）

表3 提取工艺方差分析（略）

**示非常显著性差异