制备法：各盐类成分溶解后，加马铃薯淀粉，混匀，沸水锅内煮沸30～40min（其间不时摇动，防凝块），呈糊状，待冷后，加入经消毒纱布过滤的新鲜全卵液1000mL，混匀。加2%孔雀绿20mL，混匀，分装试管（18mm×180mm）。每一试管加培养基7mL，培养基斜面高度为培养基占试管底部的三分之二处为宜，置血清凝固器内凝固。

凝固器内温度至90℃时，放入分装试管，以摆放两层为宜。待凝固器内温度达85～90℃，计时，凝固1～1.5h后取出，放冷，无菌试验后放4℃冰箱备用，一个月内使用。

制备的培养基颜色鲜艳，表面光滑湿润，有一定韧性和酸碱缓冲能力。

B2.1.2丙酮酸钠培养基

成分同改良罗氏培养基，除去甘油，加丙酮酸钠1.6g，以10%氢氧化钠调pH7.2，加葡萄糖4g，其他同改良罗氏培养基制备法。

B2.1.3酸性罗氏培养基

成分同改良罗氏培养基，把其中磷酸二氢钾增加至14g，其他同改良罗氏培养基制备法。

B2.1.43%小川培养基

成分：

磷酸二氢钾3g；谷氨酸钠1g；甘油6mL；蒸馏水100mL；全卵液200mL；2%孔雀绿6mL。

制备方法，同改良罗氏培养基。

鸡卵消毒法：

新鲜鸡卵经自来水清洗，肥皂水刷洗干净，待干后以75%酒精擦拭消毒。在无菌操作下把卵液倒入已灭菌的有刻度搪瓷杯内，灭菌纱布过滤入培养基中，加2%孔雀绿，混匀分装、凝固。

B2.2前处理方法

B2.2.1碱处理法（用于酸性罗氏培养基和3%小川培养基）

B2.2.1.12%氢氧化钠，取2g氢氧化钠，溶于80mL蒸馏水内全溶后，加水至100mL.

B2.2.1.2处理方法，取痰标本1mL加2%氢氧化钠2～4mL，室温30min，其间振荡2～3次，促痰液化。

B2.2.2酸处理法（用于改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基）

B2.2.2.12%硫酸液，取浓硫酸2mL缓缓加入蒸馏水90mL内，加水至100mL.

B2.2.2.2处理方法，取痰标本1mL加2%硫酸2～4mL，室温30min，其间振荡（或用碎痰器打碎痰液）2～3次，促痰液化。

B2.3接种方法

取消化后痰液混匀，以灭菌刻度毛细吸管取0.1mL.缓缓均匀地接种每支培养基斜面上，每份痰标本接种二支培养基，接种毕，放37℃孵箱内培养。

B2.4结果与报告

接种后应每周观察细菌生长情况，阳性生长经涂片染色验证后随时报告，培养至8周未见细菌生长，报告分枝杆菌培养阴性（如进行菌种鉴定，应于接种后3天、7天观察细菌生长情况，而后每周观察至8周）。

培养结果按下列标准报告：

培养8周未见菌落生长，报告分枝杆菌培养阴性（一）。

培养基斜面菌落生长20个以下，报告分枝杆菌阳性与菌落数。

培养基斜面菌落分散生长，占据斜面1/4以下者，报告分枝杆菌阳性（1＋）。

培养基斜面菌落分散生长，占据斜面1/2以下者，报告分枝杆菌培养阳性（2＋）。

培养基斜面菌落密集生长或部分融合，占据斜面3/4以下者，报告分枝杆菌阳性（3＋）。

培养基斜面菌落密集生长呈菌苔样分布，占据全斜面者，报告分枝杆菌阳性（4＋）。

B2.5培养基污染情况报告

观察分枝杆菌生长情况时，发现非分支杆菌生长时，报告污染菌生长，污染率高于5%时，提示培养基制备中灭菌处理不佳或消化液处理不良，应认真检查操作程序。

污染菌程度按下列标准报告：

B2.5.1污染菌生长占培养基斜面1/4以下者，报告（C1＋）。

B2.5.2污染菌生长占培养基斜面1/2以下者，报告（C2＋）。

B2.5.3污染菌生长占培养基斜面3/4以下者，报告（C3＋）。

B2.5.4污染菌生长占培养基全斜面者，报告（C4＋）。

B2.5.5培养基液化者，报告（LQ）。