梅毒辅助检查(3)

　　为使扩增效率达到最大，反应参数应选择最佳数值。使用大片段双股DNA探针检测PCR产物，而不用合成的寡核苷酸探针，因为这样可通过标记得到较高、特异的放射活性。另外，大片段探针能最大减少野生株tpp47可变序列的假阴性结果及由于Taq DNA聚合酶的错误导致碱基替代的假阴性结果。实验证实：PCR的敏感性确能达到检测单一tpp47拷贝的水平。

　　由于临床标本可能含有大量人细胞和微生物，建立对梅毒螺旋体高度特异的PCR方法是很重要的。尽管大量数椐支持47Da膜抗原基因及其相应基因具梅毒螺旋体特异性，还应深入研究该方法的特异性。在EB染色的琼脂糖凝胶偶而可见非特异的PCR产物，（如扩增淋病奈氏球菌）时就需要用tpp47特异的探针杂交来增加特异性及敏感性。仅从梅毒螺旋体梅毒亚种和雅司亚种染色体DNA获得了特异的PCR产物，表明了病原性螺旋体非常相近的亲缘关系及47Da免疫蛋白高度保守的抗原性。扩增tpp47不能如常规法那样能区分梅毒螺旋体和伯氏疏螺旋体，在用血清学试验诊断梅毒和莱姆疾病时，这两种螺旋体有交叉反应。

　　梅毒螺旋体梅毒亚种 tpf-1基因在123位置为A，雅司亚种tpf-1基因在123位置为G，Noordhoek用tpf-1或tpf-1特异的寡核苷酸探针（两种探针仅一个核苷酸不同）检测不同菌株tpf-1或tpf-1基因的扩增产物。结果表明：不能根据tpf-1或tyf-1基因123位置核苷酸的不同来区别梅毒亚种。这些菌种从梅毒患者分离，一些已用兔传代多次，通过对新鲜临床标本中梅毒螺旋体DNA的分析比较，以上结果可能是由于梅毒螺旋体在传代中点突变所致。

　　四、  脑脊液检查

　　用于诊断神经性梅毒，包括细胞计数，蛋白量，VDRL试验、PCR检测、胶体金试验等。为除外无症状神经梅毒，所有梅毒病人凡病期超过一年者均应作脑脊液检查。所有早期胎传梅毒婴儿也应检查脑脊液以除外中枢神经系统受累的可能。脑脊液细胞计数和总蛋白量的增加属非特异性变化，脑脊液VDRL试验才是神经梅毒的较可靠诊断鉴别方法和标准。但是，当有活动的神经梅毒存在时，脑脊液白细胞计数常增高（WBC>5/mm3），因此，脑脊液白细胞计数也常常是判断疗效的敏感指标。有条件的单位行脑脊液PCR检测，可以快速准确的诊断神经性梅毒。

　　五、  梅毒血清反应的假阳性

　　技术性假阳性：抗原敏感性过高，血清标本弄错或溶血或细菌污染，检查室技术不熟练。

　　生物学假阳性：非螺旋体抗原血清试验阳性率高于螺旋体抗原血清试验。前者是检测的病人的反应素，后者是检测抗梅毒螺旋体抗体。由于非螺旋体试验所用抗原也存在于其他组织，所以其他疾病甚至偶见正常人也出现反应素，因此在某些疾病中发生阳性反应，针对梅毒而言称为假阳性反应。

　　1．急性生物学假阳性：这些疾病在6个月内转阴。

　　见于麻疹、水痘、风疹、传染性单核细胞增多症、上呼吸道感染、猩红热、亚急性细菌性心内膜炎、肺炎球菌性肺炎、活动性肺结核、丝虫病、斑疹伤寒、锥虫病、回归热、钩端螺旋体、疟疾，但滴度很低，一般在1：8以下，当用螺旋体抗原血清FTA-ABS或TPHA试验检测，血清反应阴性。PCR检测阴性。

　　2．慢性生物学假阳性，可持续6个月以上或数年，甚至终身，可分为两类：

　　（1）非螺旋体抗原血清试验假阳性；这些疾病常见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、播散性盘状红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、进行性系统性硬化症、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、肝硬化、结节性多动脉炎、干燥综合征、慢性肾炎及海洛因成瘾，滴度可达1∶64～1∶128；少数孕妇，正常人群假阳性率为1%-2%.在70岁以上高龄老人中有1%出现假阳性。

　　（2）螺旋体抗原血清假阳性；发生率比非螺旋体抗原血清试验少，虽有部分其他病的患者出现FTA-ABS假阳性，其荧光染色常很弱或呈不典型的“串珠状”。

　　（3）梅毒血清反应的假阴性

　　a.一期梅毒硬下疳：一般硬下疳出现2-3周，机体才出现反应素，故早期血清反应常呈阴性。

　　b.感染梅毒立即治疗或晚期梅毒：由于血清反应素低，出现阴性。

　　c.二期梅毒假阴性；不到1%的二期梅毒患者其未稀释的血清VDRL试验呈阴性或弱阳性反应，而在高度稀释后反而为阳性，即前带现象（Prozone phenomenon），这是血清中抗心磷脂抗体过多，抑制阳性反应的结果。

　　d.技术操作或抗原敏感性低出现血清试验阴性。