总蛋白定量测定-检验技师辅导资料
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1、原理
磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强,加适量硫酸钠后,沉淀白、球蛋白的能力趋于一致,与标准蛋白浊度对比进行定量测定。
2、试剂
磺基水杨酸~硫酸钠试剂(SS~S)
磺基水杨酸3.0g
无水硫酸钠7.0g
蒸馏水加至100ml
过滤后,储存于棕色瓶中,如显色或混浊则不能用。
3、方法
(1)制备标准曲线含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀释混合人血清标准系列各0.5ml,加SS~S试剂4.5ml,充分混匀,7~15分钟后,用420nm波长比浊,以吸光度为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
(2)样品检测取待测脑脊液标本各0.5ml于两只试管中,其中一只试
管加SS~S试剂4.5ml,另一试管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作为标本空白管。在与标准曲线相同的条件下比浊,所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。
4、注意事项
(1)脑脊液如有多量细胞或混浊,应先离心以除去。如蛋白质浓度过高,应先行用生理盐水稀释后重新测定。
(2)加入SS~S试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。故操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。应随气温改变,勤作标准曲线。
5、正常参考值
腰穿CSF蛋白含量:0.2~0.4g/L池穿CSF蛋白含量:0.1~0.25g/L
侧脑室穿刺CSF蛋白含量:0.05~0.15g/L
脑脊液蛋白质含量与年龄成正比,儿童含量较低,成人稍高,老年人又比成年人高。
6、临床意义
脑脊液蛋白质含量增高,为血脑屏障被破坏的标志。颇受临床工作者的重视。
蛋白质含量增高常见于下列情况:
(1)中枢神经系统炎症。脑部感染时医学教育`网搜集整理,脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加,蛋白质分子容易透过,首先是白蛋白增高,随后是球蛋白和纤维蛋白增高。
(2)神经根病变。如急性感染性多发性神经炎(Guillain~Barre综合征),多数病例有蛋白质增高,而细胞数正常或接近正常,即蛋白~细胞分离现象。
(3)椎管内梗阻。脑与蛛网膜下腔互不相通,血浆蛋白由脊髓中的静脉渗出,CSF蛋白质含量显著增高,有时高达30~50g/L,这时CSF变黄,可自行凝固。如脊髓肿瘤、转移癌、粘连性蛛网膜炎等。此外,早产儿CSF蛋白含量可达2g/L,新生儿为0.8~1.0g/L,出生两个月后逐渐降至正常水平。
含血的CSF蛋白质含量增高。为了鉴别原来有无蛋白质增高,可用每升红细胞700×106个约相当增加蛋白质量0.01g/L来推算,用含血CSF的蛋白质含量减去含红细胞数折算成的蛋白质含量,即为原来CSF的蛋白质含量。
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