高效液相色谱法测定腰健胶囊中淫羊藿甙的含量
腰健胶囊系由验方研制而成,具有补肾、强筋壮骨、祛风除湿之功效,是一种临床疗效较好的治疗腰椎退行性病变的复方制剂。组方药物为红参、淫羊藿、牛膝、熟地、骨碎补、鸡血藤等。为了有效地控制该制剂的质量,笔者采用反相高效液相色谱法测定淫羊藿甙含量。现报道如下。
1仪器与试剂
LC-6A高效液相色谱仪,C-R3AX色谱数据处理机(日本岛津);淫羊藿甙对照品(含量测定用,中央药品生物制品检定所);甲醇(GR北京化工厂);其它试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。测试样品由湖北省中医药研究院提供。
2含量测定
2.1高效液相色谱条件
色谱柱4.6ID×250mm不锈钢柱,内填zorbax-ODS(5μ);流动相:甲醇-水-醋酸(45∶55∶1);检测器波长270nm;灵敏度0.08AUFS;柱温30℃。
2.2对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿甙对照品适量,加甲醇配制成浓度约为0.06mg/ml的对照品溶液。
2.3标准曲线的绘制
分别吸取上述对照品溶液2.0μl、3.0μl、4.0μl、5.0μl和6.0μl,注入高效液相色谱仪,按规定HPLC条件测定峰面积,根据样量和测得的峰面积计算回归方程及相关系数,结果测得淫羊藿甙的回归方程为Y=93.2+8.6208E-5xr=0.9997,线性范围0.12-0.36μg。
2.4样品的含量测定
取样品1g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醇50ml,水浴加热提取4小时,提取液回收溶剂至干,残渣以少量甲醇溶解,定溶为10ml,微孔滤膜滤过,取滤液进样2μl,以外标两点法计算含量,测定结果见附表。
附表样品中淫羊藿甙的含量测定结果
样品号淫羊藿甙含量(%)RSD(%)
10.122.78
20.152.21
30.162.06
40.131.84
50.141.92
2.5加样回收率实验
取已知含量的同批样品约2g,精密称定,平均称取5份,各加入淫羊藿甙对照品适量,按样品含量测定项下的方法提取、定容、进样测定并计算回收率,结果测得淫羊藿甙的平均回收率为101.5%,RSD=2.63%。
2.6精密度与重现性实验
取同一对照品溶液重复进样5次,淫羊藿甙峰面积积分值的RSD为0.94%;对同一份样品重复取样5次测定含量,计算得RSD=2.76%。
3讨论
淫羊藿甙为淫羊藿的主要活性成分,采用高效液相色谱的方法测定其含量,具有操作简单,分离度好,结果准确之特点,可作为其质控手段。
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