论芪对小鼠的免疫功能影响

提要 目的：探讨中药黄芪增强机体免疫功能。方法：用100%黄芪水浸出液定期给小鼠灌胃，然后测定对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生。结果：用药组小鼠的以上两项免疫学指标均有明显改变，与对照组相比差异有非常显著性（P＜0.001），未见有副作用。结论：口服黄芪可明显增强机体的免疫功能。

关键词 黄芪； 免疫功能； 小鼠分类号：R285.5 文献标识码：A

黄芪是临床上常用的中药［1］。具有补气、固表、利尿、生肌的作用，亦常用作肿瘤及免疫功能下降的辅助治疗用药。通过增加抗体产生［2］，促进IL-2、IL-3等细胞因子的分泌，明显提高机体的细胞免疫和体液免疫功能。为了进一步明确它的免疫调节功能，笔者进行了有关方面的研究。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器：黄芪（购于滨州医学院附属医院中药房）取50 g加水500 ml文火煎煮2 h，去渣浓缩为50 ml备用。美国产MultisKan全自动酶标仪，CO2培养箱由美国Forma公司生产；美国产（IE.USA）冷冻离心机：超净工作台由苏州净化设备厂生产。ConA为美国Sigma产品；MTT为FLUKA公司产品；二甲基亚矾（DMSO）苏州化工研究所产：RPMI-1640 GIBCO公司产品。

1.2 动物分组与给药：Ba1b/C小鼠，体重18～22 g雌雄兼有，购于北京医科大学实验动物中心。将动物随机分为两组，每组8只，Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为药物实验组。Ⅰ组用生理盐水灌胃，1次/d，0.5 ml/（次*只）；Ⅱ组用黄芪液灌胃，1次/d，0.5 ml（次*只）；共灌胃10次。

1.3 检测指标及方法1.3.1 淋巴细胞增殖反应［3］：无菌制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI-1640不完全营养液洗涤2次，1000 r/min离心10 min，然后用完全营养液配成5×106/ml，取100 μl加入96孔细胞培养板内（每孔含5×105/ml个细胞），加入终浓度为5 μg/ml的ConA， 37℃，5% CO2培养箱中培养48 h后，每孔加入10 μl MTT溶液（5 mg/ml），再继续培养至12 h，然后加入DMSO 100 μl，充分振荡后静止20 min，用检测波长560 nm全自动酶标仪进行比色分析。

1.3.2 IL-2的诱生：取上述已制备的脾细胞悬液5×106/ml，放培养瓶中37℃，5% CO2培养箱中培养40 h，离心收集上清液，-20℃冰箱保存备用。

1.3.3 制备活化的脾淋巴细胞［5］：按上法取正常Balb/C小鼠无菌取脾脏，制成5×106/ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度为5 μg/ml，置37℃，5% CO2培养箱中培养48 h，收集细胞，离心洗2次，用完全RPMI-1640配成5×105/ml细胞悬液，作为测IL-2的反应细胞医学|教育网搜索整理。

1.3.4 IL-2活性检测：取-20℃保存的IL-2上清，并做1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL-2上清原液或不同稀释度的IL-2上清100 μl，以及上述反应细胞100 μl；阴性对照不加IL-2上清，加100 μl 1640培养液，各没4复孔。于37℃，5% CO2培养箱培养48 h，每孔加MTT（5 mg/ml）10 μl，继续培养4 h，吸弃100 μl上清，加入酸化异丙醇100 μl（0.04 mol/L、HCl-异丙醇），充分振荡后静止20 min，用检测波长560 nm HCl全自动酶标仪进行比色分析。

1.4 结果处理：实验结果采用组间均数差异性t检验的方法进行统计分析。

2 结果

2.1 黄芪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响：表1结果表明，用药组对脾脏T细胞增殖反应明显，组间相比有非常显著性差异（P＜0.001）。

2.2 黄芪对小鼠IL-2产生的影响：表2结果显示，用药组IL-2的水平明显增强，组间相比有非常显著性差异（P＜0.001）。

表1 黄芪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响 （±s）

组别 n A 560 P对照组 8 0.116±0.004药物组 8 0.402±0.021 ＜0.001

表2 黄芪对小鼠IL—2产生的影响 （±s）

组别 n A 560 P对照组 8 0.140±0.005药物组 8 0.313±0.014 ＜0.001

3 讨论本试验研究了黄芪对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响，结果表明，黄芪可使ConA激发的T淋巴细胞增殖反应明显［3］，表明黄芪对T细胞功能具有增强作用；同时对B细胞免疫功能也具有明显增强作用。已知T细胞是机体免疫系统赖以实现细胞免疫调节的重要成分，在机体特异性免疫应答中起核心作用，T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和免疫调节。本文研究还发现，黄芪对IL-2产生有促进作用。IL-2主要是由辅助性T细胞产生的非特异性细胞因子，作用已活化的T细胞促进其增殖，并对B细胞有调节作用。黄芪可明显促进小鼠脾细胞产生IL-2的水平，间接增强体液免疫应答。分析上述免疫指标改变的原因可能是黄芪对T淋巴细胞的直接促进作用，或作用于巨噬细胞促进IL-1产生，从而促进了T淋巴细胞产生淋巴因子，进而促进了T淋巴细胞增殖及IL-2的产生。以上两项免疫学指标均有明显改变，组间相比有非常显著性差异（P＜0.001）。提示机体免疫功能下降者或肿瘤辅助治疗者可长期口服黄芪以增强免疫功能，预防某些疾病，为临床应用黄芪提供了实验依据。