猪羊牛蹄甲中氨基已糖定量分析

猪羊牛蹄甲中氨基已糖定量分析：

酸性粘多糖为动物结缔组织中的结构成分（医考网搜集整理），系由氨基己糖及己糖醛酸交替结合而成的长链分 子，除分布于基质外，还多以蛋白质复合体与胶元纤维相结合的形式而存在【1，2】。1973年 Kim 从鹿角（骨化的角）中提出一种胶元蛋白，其中含氨基己糖【3】，由此 提示酸性粘多糖为蹄甲类的一类重要成分。故本文对这三种蹄甲的氨基己糖进行定量分析。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：721型分光光度仪。

1.2 试剂：半乳糖氨，乙酰丙酮，对二氨基苯甲醛。

2 方法与结果

2.1 试剂的配制

2.1.1 乙酰丙酮试剂：将1 ml 乙酰丙酮溶解于50 m l 0.5 N Na2CO3 溶液中，临用前配制。

2.1.2 对二甲氨基苯甲醛显色剂：将对二甲氨基苯甲醛0.8 g 溶解于30ml 50% 的乙醇和30ml HCl 中。溶液在-10℃保存。

2.1.3 氨基半乳糖标准液：将1mg 氨基半乳糖溶解 于100 ml 蒸馏水中，备用。

2.2 样品液的制备：分别取样品0.2 g，精密称定，分别用6 mol/L HCl 水解，水解物加6 mol/L NaOH 中和至中性，并定容至100 ml，备用。

2.3 最大吸收波长的测定：精密吸取氨基半乳糖标 准溶液0.2 ml 及上述各样品液0.1 ml 于带刻度的具塞试管中，加乙酰丙酮试剂1 ml，置沸 水浴中乙酰化25 min，然后加无水乙醇3 ml 及显色剂（对二甲氨基苯甲醛）1 ml，强力振摇 ，置60℃水浴中保温1.5 h.以蒸馏水为空白，在450～600 nm 范围内，721型分光光度计上 测吸收度。结果样品与标准品均在535 nm 处有最大吸收。故选择535 nm 为测定波长。

2.4 稳定性试验：精密吸取标准液0.2 ml 于具塞 试管中，加乙酰丙酮试剂1 ml，置沸水浴中乙酰化25 min，然后加入无水乙醇3 ml 及显色 剂1 ml，强力振摇，置60℃水浴中保温1.5 h，以蒸馏水为空白，于535 nm 处测定吸收度， 结果见表1.

由表1可以看出，在6 h 内，吸收度值基本无变化。

2.5 标准曲线的绘制：精密吸取标准液0 ，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml，分别置于10 ml 具刻度的硬质试管中，加乙 酰丙酮试剂1 ml，置沸水浴中乙酰化25 min，然后加入无水乙醇3 ml 及显色剂1 ml，强力 振摇，置60℃水浴中保温1.5 h，以蒸馏水为空白，于535 nm 处测吸收度。计算 回归方程为y=0.335 5+0.644 6x，γ=0.998 3.

2.6 Elson-Morgan法测定酸性粘多糖 含量：分别吸取上述各样品液0.1 ml 于硬质试管中，其余步骤按标准曲线项下进行。将所 测得的吸收度代入回归方程，计算含量。结果见表2.

3 讨论

粘多糖为动物界所特有，主要存在于细胞间质，是结缔组织无定形基质的重要成分，也是实 质细胞的生存环境。它可调节体内阴离子浓度，并能与一些物质结合调节肌体免疫功能，防 御细菌或病毒感染，抗凝血，抑制血栓形成，激活脂蛋白酶，调节肌体脂类代谢。随着生药 学和物理学的进展，酸性粘多糖也逐步成为一类较有发展前途的新型药用活性成分。由于条件的限制，本文仅对氨基己糖的含量进行了定量，至于如何从蹄甲中提取粘多糖，并经化学、物理及光谱测定确证其种类，尚值得进一步研究。