本草消渴丹糖尿病大鼠糖代谢酶活性的影响

【摘要】 目的探讨中药复方—本草消渴丹对2型糖尿病大鼠糖代谢的关键酶己糖激酶、苹果酸脱氢酶活性的影响，为临床用药提供科学依据。方法选择高脂、高糖饲料加小剂量链脲佐菌素（STZ，25 mg/kg，腹腔注射）的方法建立大鼠2型糖尿病模型，分别以本草消渴丹和西药二甲双胍进行干预，每周末断尾取血检测空腹血糖值。治疗4周后检测大鼠空腹血糖值、肌肉己糖激酶（HK）和肝脏苹果酸脱氢酶活性（MDH）。结果本草消渴丹治疗可以显著降低糖尿病大鼠血糖，其肌肉组织HK、肝脏组织MDH活性与模型组对比有显著性差异。结论中药复方—本草消渴丹降低血糖的作用机制之一可能是直接或间接提高了葡萄糖氧化分解的酶活性；本草消渴丹对对抗糖尿病体重降低有一定作用。

【关键词】 本草消渴丹；糖尿病；糖代谢；己糖激酶；苹果酸脱氢酶

糖尿病是一种常见的内分泌系统代谢障碍性疾病，其发病率有逐年上升趋势，其特征性表现为高血糖和糖尿。西医方面虽有多种治疗方法和药物，但由于西药的毒副作用，使西药在糖尿病的治疗方面未能取得突破性进展。近年来，中医药在防治糖尿病却表现出巨大的潜力和光明前景，无论是单味中药还是中药复方，在治疗糖尿病方面均显示出很大的优势［1，2］，本实验以验方生地、山药、枸杞和山萸肉为基础经提取制成本草消渴丹，通过干预2型糖尿病大鼠模型观察其对2型糖尿病大鼠血糖和糖代谢酶活性的影响，为临床用药提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 药物

将复方中药（主要成分：生地20 g，山药20 g，枸杞子10 g，山萸肉15 g）分别用醇提水沉法提取、浓缩、干燥、制成颗粒剂，每克颗粒剂相当于原药材9.2 g，由河北大学医学部药剂教研室提供，以上药材购自保定市中药饮片有限公司；盐酸二甲双胍片，规格每片0.25 g，由天津太平洋制药有限公司提供，批号071204.链脲佐菌素（STZ），由美国Sigma提供，批号S-0130.己糖激酶试剂盒和苹果酸脱氢酶试剂盒均由宝生物工程有限公司提供，批号分别为2005080316，2005080406.其他试剂均为市售产品。

1.2 仪器

AR1530电子分析天平（1/1000，美国奥豪斯）；GT-1640京都血糖仪（SUPER GLUCOCARDⅡ）及试纸（由日本ARKRAY， Inct 提供）；可见-紫外分光光度计（日本岛津）；TGL-16G离心机（上海安亭仪器厂）；CU600电热恒温水浴箱（上海一恒）；JJ-2组织捣碎机（常州国华电器有限公司）。

1.3 高脂饲料的制备［3］

基础饲料：碳水化合物占60%，蛋白质占22%，脂肪占10% （植物脂肪为主），其它成分占8%.高脂、高糖饲料由基础饲料加炼猪油10%，蔗糖20%，猪油10%，胆固醇2.5%，胆酸钠1%，其中碳水化合物占50%，蛋白质占13%，脂肪占30%（动物脂肪为主），其它成分占7%，由河北医科大学医学动物实验中心加工成饲料颗粒。

1.4 动物清洁级健康

雄性Wister大鼠32只，体重160～200 g，由河北医科大学实验动物中心提供（合格证号604104），饲养在室温（20～25℃），相对湿度40%～70%的环境条件下，每笼8只，共分6笼，自由采食、饮水。

2 方法

2.1 造模与分组［3］

将上述大鼠适应性饲养1周后，称重，随机分为两组，第1组8只为正常对照组，喂以基础饲料；第2组24只大鼠为2型糖尿病造模组。造模组高脂、高糖饲料喂养3周后，一次性腹腔注射STZ 25 mg/kg体重（STZ溶于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，所配浓度为10 mg/ml）；正常对照组腹腔注射相应体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。造模组继续高糖、高脂饲料饲养4周后，大鼠禁食12 h，按2 g/kg体重灌胃20%D-葡萄糖溶液，做口服葡萄糖耐量试验，凡0 min和120 min血糖分别≥7.8 mmol/L或葡萄糖负荷后2 h血糖≥11.0 mmol/L的大鼠［4］为造模成功。

选择造模成功的大鼠24只按体重编号，参照随机数字表法分为3组，分别为模型组、二甲双胍组、本草消渴丹治疗组。各组均继续喂以高糖高脂饲料4周，并每周称体重。

2.2 治疗第7周后，各组动物分别灌胃相应药物或生理盐水，1次/d，给药按人与大鼠体表面积比折算成等效剂量。正常对照组、模型组分别每日灌胃等剂量的生理盐水；二甲双胍组每日灌胃二甲双胍70 mg/kg，中药治疗组每日灌胃本草消渴丹1.25 g/kg.

2.3 样本的采集与处理在每周末的同一时间，各组大鼠均禁食12 h，第2天断尾取血，用血糖仪测定血糖；4周实验结束后，各组大鼠断头处死，迅速剥离后腿股四头肌和肝脏组织，称重后放入-70℃冰箱待检。肌肉组织HK、肝脏组织MDH活性测定参照试剂盒说明书使用［5］。

2.4 统计学处理

将所有检测指标的数据经SPSS11.0处理，±s表示，采用单因素方差分析，组间用LSD法进行多重比较。

3 结果