灭菌法-无菌操作法

　　无菌操作法系指整个生产过程控制在无菌条件下进行的一种技术操作。它不是一个灭菌的过程，只能保持原有的无菌度。本法适用于某些药品加热灭菌后，发生变质、变色或降低含量，如注射用粉针、生物制剂、抗生素等。无菌操作所用的一切器具、材料以及环境，均须用前述适宜的灭菌方法灭菌。

　　无菌操作室的设计及层流洁净室的要求见第三节。

　　（一）无菌操作室的灭菌

　　无菌操作室的空气灭菌，可应用室内空气灭菌剂如甲醛、丙二醇等蒸汽。药厂无菌操作室的灭菌，一般用甲醛溶液直接加热的方法。即每1m3的空间用甲醛溶液30ml，用特制的气体发生器输入。室温应保持在24~40℃以上，以免室温过低甲醛蒸汽聚合而附着于表面，湿度保持在60%以上，密闭熏蒸不少于8小时，然后开启总出风口排风并通入无菌空气约2小时，直至室内无臭气为止。

　　也可用甲醛-高锰酸钾法，即每1m3的空间用甲醛溶液约20ml与高锰酸钾10g及温水20ml进行熏蒸灭菌。

　　现也采用臭氧进行灭菌，臭氧由专门的臭氧发生器产生。“德瑞”牌臭氧发生器由主机和控制柜两部分组成，安装在清洁、干燥、通风良好的环境内，周围环境湿度最好控制在85%以下。主机一般安装于空气净化空调机组中的过滤后端或风道中，以净化空调管道中的循环风作为载体，发生的臭氧利用空气净化通风系统送风或回风管道的循环风带出，从而达到消毒、灭菌效果。

　　除上述方法定期进行较彻底的灭菌外，还要对室内的空间、用具（桌椅等）、地面、墙壁等用外用灭菌剂（如3%酚溶液等）喷洒或擦拭。其它用具尽量用热压灭菌法或干热灭菌法灭菌。每天工作前开启紫外灯1小时，中途休息时也要开0.5-1小时。

　　（二）无菌操作

　　操作人员进入操作室之前应洗净手、脸、腕，换上已灭菌的工作服和专用鞋、帽、口罩等，勿使头发、内衣等露出，剪去指甲，双手按规定方法洗净并消毒。所用容器、器具应用热压灭菌法或干热空气灭菌法灭菌，如安瓿等玻璃制品应在250℃/30min或150-180℃/2-3h干热灭菌，橡皮塞用121℃/1h热压灭菌。室内操作人员不宜过多，尽量减少人员流动。用无菌操作法制备的注射剂，大多要加抑菌剂。

　　制备少量无菌制剂时，可用无菌操作柜。无菌操作柜分小型（又称单人）与联合柜两种，式样有单面式与双面式两种，可用木制，四周配以玻璃制成。前面操作处装木板，板上挖二圆孔，孔内密接乳胶手套或袖套，供伸入双手在柜内操作。药品及用具等由侧门送入柜后关闭，柜的中央上方装紫外线灯一只，并用外用灭菌剂喷雾灭菌。联合无菌操作柜是由几个小型操作柜联合制成，以使原料的精制、传递、分装及成品暂时存放等工作全部在柜内进行。操作时可完全与外界空气隔绝。

　　（三）无菌检查

　　药品经无菌操作法处理后，需经无菌检查法检验证实已无活的微生物存在后才能使用。法定的无菌检查法有直接接种法和薄膜滤过法，具体操作方法详见《中国药典》（2000年版）附录。

　　薄膜过滤法用于无菌检查的突出优点，在于可滤过较大量的检品和可滤除抑菌性物质，滤过后的薄膜，即可直接接种于培养基中，或直接用显微镜观察，本法具有灵敏度高、不易产生假阴性结果、减少检测次数、节省培养基及操作简便等优点。

　　无菌检查的全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物的污染，因此无菌检查多在层流洁净工作台中进行。